丹麦的Palermo医生于1991年发明了第二代试管婴儿技术。Palermo医生首次用了卵子内单子注射(ICSI)技术，这项技术能让一位较严重的夜不育男不育症患者生育出自己的孩子。当代试管婴儿发生子数少、子活力低或子畸形时，子与卵子结合产生卵结合困难。为了让子更容易和卵子结合，使用一种特殊的方法，立即将子注射入卵细胞，然后立即制成卵结合，由此产生的胚胎，婴儿称为第二代试管婴儿(ICSI)。

二代试管婴儿技术是直接将子置入卵细胞中，通过重生透明带与卵子“脱离”，从而“解除”整个过程，这个过程应该由子本身完成。它在医学上被称为ICSI技术。这项技术使得子数量减少，子活力下降的男有希望高生育能力，而无子症的人有可能拥有自己的孩子。用单子注射技术进行第二代试管婴儿的治疗，对子质量没有影响。Icsi技术适用于比较少、弱、畸形型子症患者，首次试管婴儿失败者用第二代试管婴儿技术助孕技术可获得较高的成功率。

第二代技术与代技术有何不同？

一代试管婴儿(IVF)即基本体外受技术(IVF)，是指子与体外自然结合并再次培养至卵裂期胚胎或囊胚，再移植回母亲的子宫内发育、发育的全过程。

IVF是现阶段各生殖中心常用的受方法，主要适用于女原因引起的不育。IVF的优越依赖于子卵子结合的自然，对配子的人为干扰较少；但是有10个左右的患者发生完全不授或低受率。

卵胞浆内单子显微镜(ICSI)是第二代试管婴儿，它是利用显微镜技术，将子注入卵子，以使卵结合，从而使受卵结合。

ICSI主要用于子数量太少，或者没有进行锻炼和授能力，或者其它子通过阻碍产生的授失败。而与之相比，第二代可显著减少子所需量，理论上每一只成熟只需一条成熟子即可完成。

这种治疗不受液常规检查主要参数的限制。对中、重度少弱症患者，甚至无子症患者均可使用ICSI助孕(取自男睾丸或附睾)。但是就技术而言，二代比一代多一代，操作起来就更加困难一些。就胚胎质量而言，一代和二代所产生的胚胎质量相似，甚至有一代胚胎可能稍好一点。因为这代人是自然，人为干预就会减少。